吃早餐回来,正好紫外照得差不多了,关紫外开风机。
细胞间里是这样的,分里外间,有的地方是一间,而且与其他比如western、PCR等*作是在一起,不单独配置,简单说就是在一间实验室里放了个细胞台,没有单独的细胞间。里间需要照紫外,外间不需要。里间有几个细胞台和离心机、冻细胞的液氮罐。
照紫外的过程会产生大量的臭氧,对黏膜刺激比较大,有的时候着急占台子,就没等风机吹就闯进去了,白天就会感觉眼睛烧的慌。
把高压灭菌好的各种盒子放进细胞间*作台,*作台也有独立的紫外和风机,里面是正压,打开风机的时候会从玻璃下吹出风来。有洁癖的会把各种盒子放进去之后继续照一下紫外,这种人比较可恨,你在*作细胞,她却在旁边开紫外,还说玻璃不透紫外,但是臭氧会有啊,一边照蓝光一边呼吸旁边台子的臭氧,那感觉。
把各种盒子放进台子后,开始热培养基,因为培养基是从四度冰箱拿出来的,冰凉的不能立刻使用。热培养基就跟热牛奶一样,放水浴槽里,温度是36至37度。
喷酒精,拿进台子烧瓶口,然后取培养皿,用吸管吸培养基加到培养皿里,100mm的皿加10-15ml,60皿加3ml,注意*作的时候手和胳膊不要经过任何敞口的器皿上方,防止污染。
然后去液氮罐里拿细胞,大家知道治疗不孕不育有个冻卵吧,冻卵就是放进液氮里的,常年保存。
从液氮里取出的细胞要尽快解冻,用镊子夹着在水浴锅里快速摇动,也有的说,放进水浴里轻轻摇即可,只要里面全化开,立即拿到台子里用吸管吸出加到培养基里。当然,拿进台子之前要喷一通酒精消毒。
细胞加进去后,十字方向摇动培养皿均匀一下,然后小心翼翼捏着放进孵箱。
一般6-10小时细胞定植后要更换培养基,主要目的是去除冷冻细胞里面加入的DMSO,这样细胞状态会比较好
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